Coloration de Ziehl-Neelsen

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Les colorations utilisées qui mettent en évidence l'acido-alcoolo-résistance, caractère fondamental des mycobactéries, prennent en compte la difficulté de pénétration des colorants.

Elles comportent trois temps :

• l'application d'un colorant énergique à chaud ou à froid ;
• les décoloration successives par un acide fort puis a l'alcool à 90°;
• une recoloration de contraste.

Le premier colorant utilisé dans les technique classiques est la fuchsine concentrée . Un fluorochrome, l'auramine est utilisé pour les techniques en fluorescence.

Coloration de Ziehl-Neelsen

(technique classique de référence)

• 1er temps: coloration par la fuchsine à chaud
  • Recouvrir le frottis d'un papier filtre imprégné de fuchsine de Ziehl
  • Chauffer à émission de vapeur pendant 10 minutes au moins, en veillant à ne pas laisser sécher le papier. Rincer à l'eau distillée stérile.

• 2ème temps: décoloration
  • Tremper la lame deux minutes dans une solution d'acide. Rincer.
  • Tremper la lame cinq miniutes dans l'alcool à 90°. Rincer.

• 3ème temps: recoloration
  • Reconvrir la lame deux minutes d'une solution de bleu de méthylène. Rincer.

L'observation s'effectue au microscope optique, avec objectif à immersion.

• Les mycobactéries apparaissent comme des bacilles rouges sur fond bleu-gris.

Remarques Importantes

La coloration de Ziehl-Neelsen, bien qu'elle soit une technique de référence, est de moins en moins utilisée en raison des risques qu'elle fait prendre au manipulateur. En effet les colorants tels que la fuchsine sont hautement toxiques et cancérigènes, tout particulièrement lorsqu'ils sont utilisés à chaud (à cause des vapeurs).

Il existe aujourd'hui des colorations alternatives inspirées de la technique de la coloration de Ziehl-Neelsen mais présentant des risques moindres pour les manipulateurs.

• Voir coloration de Kinyoun (modifiée)
• Voir coloration à l'auramine

Articles connexes

• Coloration de Gram
• Les mycobactéries