Techniques de biologie moléculaire

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Principales techniques utilisées couramment en biologie moléculaire :

• PCR : (Polymerase chain Reaction) cette technique est utilisée pour amplifier de l'ADN, c'est a dire obtenir une grande quantité de copies d'une séquence nucleotidique donnée.

• RT-PCR : technique dérivée de la PCR et permettant de cloner un gène ou de quantifier son taux de transcription (quantité d'ARN présente)

• Electrophorèse sur gel : cette technique permet de séparer des molécules en fonction de leur taille (appelée poids moleculaire) en les faisant migrer a travers un gel par application d'un champ électrique. Cette technique peut etre utilisée pour séparer de l'ADN, de l'ARN (gels d'agarose ou d'acrylamide) ou des proteines (gel d'acrylamide)

• Clonage : technique qui consiste à isoler un fragment d'ADN et à le multiplier à l'identique en l'« insérant » dans une molécule d'ADN « porteuse » appelée vecteur permettant son amplification

• Transformation génétique ou transgenèse : technique consistant à introduire un ou plusieurs gènes dans des cellules (par exemple végétales, animales, bacteriennes) menant à la transmission du gène introduit, ou transgène, aux générations successives.

• Southern blotting : technique utilisant l'électrophorèse sur gel et permettant de détecter des séquences d'ADN particulière. Utilisé frequemment en biologie moléculaire pour détecter le nombre de copies de transgènes insérés dans le génome d'une cellule ou d'un organisme génétiquement modifié.

• Northern blotting : technique dérivée du Southern blotting utilisée pour détecter et quantifier un type d'ARN donné.

• Western blotting : technique dérivée du Southern blotting utilisée pour détecter et quantifier un type de proteine donné.

• Digestion de restriction (restriction digest): technique utilisant des enzymes de restriction pour couper specifiquement une molécule d'ADN afin de la manipuler ou de la cloner.

• Minipréparation ou miniprep: technique permettant d'extraire de bactéries transformées une petite quantité d'ADN plasmidique.